La realización de ensayos in vivo o ensayos preclínicos, requieren del uso de anticuerpos ultra-puros con mínimas concentraciones de endotoxinas y libres de preservantes y estabilizantes. Además, a diferencia de los inmunoensayos in vitro, para los estudios en animales son necesarias cantidades mayores de anticuerpos. Estas peculiaridades pueden despertar dudas en cuanto a la obtención de anticuerpos para estos fines.
En esta entrada respondemos a algunas de las preguntas más frecuentes en relación a los anticuerpos en bulk para ensayos in vivo.
Como comentábamos en la introducción, cualquier anticuerpo no resulta apto para su administración en animales de experimentación. Los anticuerpos para ensayos in vivo pueden obtenerse en casas especializadas y de reconocido prestigio como BioXcell.
Estos anticuerpos presentan mínimos niveles de endotoxinas (hasta < 1EU/mg), y se suministran en PBS libres de preservantes y estabilizantes.
Los anticuerpos para ensayos in vivo se clasifican en dos categorías (InVivoMab e InVivoPlus) en función de sus características y especificaciones técnicas.
En la siguiente tabla se resumen las diferencias entre los anticuerpos InVivoMab y los anticuerpos InVivoPlus para ensayos in vivo:
Los anticuerpos deben almacenarse sin diluir a 4ºC y resguardados de la luz. A diferencia de otros reactivos, NO SE RECOMIENDA CONGELAR los anticuerpos para investigación in vivo para evitar pérdidas de actividad.
Por un lado, es muy importante que los anticuerpos para uso in vivo se mantengan estériles. Para ello, deben manipularse siempre en cabinas de flujo laminar utilizando material estéril (pipetas, puntas, tubos, jeringas, buffers, etc.).
Estos anticuerpos deben mantenerse en frío hasta el momento de su administración.
Los anticuerpos en bulk para ensayos in vivo son estables durante un año, siempre que se almacenen según las instrucciones indicadas en la hoja técnica de los mismos.
La mayoría de los anticuerpos se suministran en solución acuosa en PBS a 20mM NaH2PO4/KHPO4 y 135mM NaCl, y siempre libres de preservantes y estabilizantes como Azida sódica, BSA, etc.
En caso de solicitarlo, estos anticuerpos pueden suministrarse en un buffer diferente.
La concentración de estos anticuerpos puede sufrir variaciones entre lotes, y habitualmente se encuentra entre 4mg/mL y 10mg/mL.
Se recomienda diluir estos anticuerpos en el buffer de dilución InVivoPure con pH acorde al pH del anticuerpo en cuestión.
Como alternativa, los anticuerpos se pueden diluir en PBS estéril con pH igual al del anticuerpo para evitar fenómenos de agregación.
Una vez diluidos los anticuerpos, no deben almacenarse durante más de 24 horas.
Los cambios de temperatura, los ciclos de congelación-descongelación, la agitación durante el transporte o el almacenamiento durante largos periodos de tiempo, pueden hacer que aparezcan agregados tanto en el fondo del vial como en suspensión.
Estos agregados se pueden eliminar mediante agitación a temperatura ambiente, filtración o centrifugación.
Para finalizar esta entrada, os dejamos un link al listado completo de anticuerpos en bulk para ensayos in vivo. ¡No dudéis en contactar con nosotros para aclarar cualquier duda!
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